P450?含有血紅素且能催化羥化、環氧化、脫烷基化、碳-碳偶聯、氧化裂解等各式各樣不同反應，因而被稱為“紅色萬能?”，通過?催化可解決藥物和化學品生產過程造成的環境污染問題。但是自P450?被發現數十年來，其晶體結構一直沒能被解析出來，催化機理也困擾著科學界。
近日，湖北大學生命科學學院、省部共建生物催化與?工程國家重點實驗室的陳純琪教授團隊，和馬立新教授、郭瑞庭教授合作，成功破解難題，在P450?完整催化機理的研究方面取得重要突破：闡明了電子如何從還原?區域進入底物結合區的反應機理。相關研究成果發表在最新一期《自然·通訊》上。
易斷裂降解，難識P450?真面目
“自然界中存在非常多不同種類的P450?，它們參與細胞的生理調控、藥物代謝以及許多重要藥物的合成。”陳純琪介紹，比如我們人類的染色體上就帶有超過50個P450?的基因，它們負責膽固醇、固醇類激素和維生素D等重要化合物的合成﹔許多具有藥物活性的植物或微生物次級代謝物（如青蒿素、紫杉醇），也是由P450?負責催化合成的﹔還有一些藥物的化學結構非常復雜，單純以人工合成方法大量生產極為困難，而P450?能夠對這類復雜過程進行精准調控。
科學家們發現，P450?能夠識別多種底物（參與生化反應的物質），由此利用基因工程改造P450?來量身定制化學反應，成為一個熱門研究方向。2018年諾貝爾化學獎得主阿諾德教授，就是利用改造P450?實現各種特殊的化學反應而獲獎。
一個完整的P450?系統由3個部件組成：帶有血紅素的底物結合區﹔負責產生電子的還原?﹔連接底物結合區和還原?的通道。“這就像一個電器需要插上電才能工作，帶有血紅素的底物結合區就像電器本身，供電的插座就像還原?，而電線就是連接兩端的電子通道。”陳純琪解釋道，在建立一個P450?反應系統時需要把所有組件都找齊了，組裝在一起后才能進行催化反應。有一些三種組件都串聯在一起的P450?，稱作“自給自足P450?”，這樣的系統不需要另外尋找相匹配的“供電器”與“電線”，因此在應用的時候有巨大優勢，也是方便科學家們研究的“明星”P450?。
P450?的血紅素結合區識別底物機制的研究已經相當成熟，針對底物結合區的改造工程也有非常多的研究報道，但是對於電子如何從還原?送入活性中心卻仍有許多未知之處。而這需要獲得P450?的晶體結構，即完全看清?的長相。由於全長P450?在表達、純化后，?蛋白很容易斷裂、降解掉，因此難以獲得其完整的晶體，識別全長P450?的結構也一直沒有任何突破。
“看”清全長結構，解開P450?催化路徑
陳純琪帶領的結構生物學研究團隊經過不懈的努力，找到了一個來源於耐熱菌中“自給自足”的P450?，這個P450?在70℃的高溫下也特別穩定，也不會斷裂或是降解，因此特別易於結晶。陳純琪團隊利用先進的X光晶體學技術，成功解析了“自給自足P450?”的高分辨率全長結構。
“我們經過研究發現，整個P450?的三個組成部件, 從基因序列的排序依次為：血紅素結合區—還原?結構域—鐵氧還蛋白結構域。這三個區域各帶有一個輔因子，三個輔因子成為P450?內部電子傳遞的中轉站。電子傳遞就像送快遞一樣，需要經過幾個中轉站。”陳純琪介紹，晶體結構顯示，血紅素結合區和還原?分別位於整個蛋白質的兩端，血紅素結合區這一端朝外，露出開口以方便底物進入，而電子傳遞經過幾個中轉站，最終成功送達到血紅素進行?催化反應。
科研人員觀察到中間有許多的氨基酸，並証實了其中幾個氨基酸對於P450?的電子傳遞很重要。這是迄今為止國內外首次解析“自給自足P450?”的全長三維結構，是一個非常重要的裡程碑，對於其他各類P450?的改造與應用具有重要指導意義。
陳純琪表示，他們研究團隊目前正利用所獲得的結構學信息，加速對P450?進行更加深入的設計改造，以期培育出能催化更多重要反應的新?，早日實現P450?的綠色生物工藝制造，並應用於生物科技、制藥工程與化工產業。(陳 曦)
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